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關(guān)于染色質(zhì)免疫共沉淀的原理介紹

更新時間:2021-12-17   點擊次數(shù):2170次
  染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)的原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,并將其隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA段,通過對目的片斷的純化與檢測,從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。
  這項技術(shù)通過蛋白質(zhì)與DNA互作來分析目標(biāo)基因活性以及已知蛋白質(zhì)的靶基因,被廣泛應(yīng)用于體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子與靶基因啟動子上特異核苷酸序列結(jié)合方面的研究。該技術(shù)常與DNA芯片和分子克隆技術(shù)相結(jié)合。
  染色體免疫共沉淀是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來的方法,也稱結(jié)合位點分析法,在過去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動態(tài)作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。近年來,這種技術(shù)得到不斷的發(fā)展和完善。采用結(jié)合微陣列技術(shù)在染色體基因表達(dá)調(diào)控區(qū)域檢查染色體活性,是深入分析癌癥、心血管疾病以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等疾病的主要通路的一種非常有效的工具。
  染色質(zhì)免疫共沉淀的原理介紹:
  一、檢測目標(biāo)基因活性
  在保持組蛋白和DNA聯(lián)合的同時,染色質(zhì)被切成很小的片斷,通過運(yùn)用對應(yīng)于一個特定組蛋白標(biāo)記的生物抗體,將目標(biāo)片段(組蛋白發(fā)生特異標(biāo)記的片段)沉淀下來。ChIP是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合以及細(xì)菌蛋白質(zhì)的“proteinA”特異性地結(jié)合到免疫球蛋白的Fc片段的現(xiàn)象合用開發(fā)出來的方法(免疫磁珠結(jié)合proteinA,proteinA結(jié)合抗體Fc段,抗體結(jié)合抗原即發(fā)生特異標(biāo)記的組蛋白,這里要注意組蛋白是和DNA結(jié)合的,這樣就把目標(biāo)組蛋白和DNA的復(fù)合體沉淀下來了)。再將組蛋白與DNA分離,用獲得的DNA去做PCR分析和序列測定等檢測技術(shù),從而進(jìn)一步檢測哪些基因的組蛋白發(fā)生了修飾。
  二、檢測已知蛋白的靶基因
  在生理狀態(tài)下把細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和DNA交聯(lián)在一起,超聲波將其打碎為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過所要研究的目的蛋白質(zhì)特異性抗體沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA段,通過對目的片斷的純化與檢測,從而明確蛋白與哪些基因相互作用。

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